A Caskin1 fehérje szerepe a dendrittüskék kialakulásában és érésében in vitro Biológia

35 OTDK, Biológia Szekció, Neurobiológia 1. Tagozat.

A Caskin1 fehérje szerepe a dendrittüskék kialakulásában és érésében in vitro

Különdíj: t

Hallgató: Csehó Fruzsina
Szak: Biológus, Képzés típusa: msc, Intézmény: Eötvös Loránd Tudományegyetem, Kar: Természettudományi Kar

Témavazető: Dr. Bencsik Norbert - adjunktus, Eötvös Loránd Tudományegyetem Természettudományi Kar

A Caskin1 multidomén állványfehérje nagy mennyiségben fejeződik ki az agyban és a szinapszisok területén feldúsulva jelenik meg. Laborunk már korábban igazolta, hogy a Caskin állványfehérjék hiánya rontja az állatok kognitív memóriáját és azok térbeli tanulási képességét. Érett idegsejt-tenyészetekben (DIV15-16) a Caskin fehérjék hiánya gátolja az érett gomba alakú dendrittüskék kialakulását in vitro.

Kísérleteim során a Caskin1 multidomén állványfehérje SH3 domén és prolin gazdag régió mutáns foszforilációs helyeinek hatásait vizsgáltam az idegsejtek dendritjein kialakuló tüskék morfológiájára és a filopódiumok (hosszú, vékony instabil membránkitüremkedések) motilitására (DIV10-11) korú tenyészeteketben. A morfológia és a motilitás kísérletekhez Caskin génhiányos egerek hippokampuszából kiültetett idegsejt-tenyészeteket készítettem. Pont-pásztázó konfokális mikroszkóppal, fixált mintákon végeztem el a tüskék morfológiai elemzését. Azt az eredményt kaptam, hogy a morfológiai eredményeink megegyeznek az érett tenyészetekben megfigyeltekkel. A Caskin1 túltermelése szignifikánsan megnöveli a széles fejjel rendelkező gomba alakú tüskék arányát, ezzel párhuzamosan csökkenti a fonalas tüskék számát a kontrollhoz viszonyítva. A Caskin1 vizsgált mutációi ezt a hatást blokkolják és a filopódiumok száma lesz nagyobb.

Élősejtes videómikroszkópiával a fonalas protrúziók motilitásának elemzését végeztem el A fonalas protrúziók motilitásának vizsgálatakor azt tapasztaltam, hogy a Caskin hiányos sejtekhez képest a Caskin1 WT (vad típusú) sejtekben szignifikánsan megnő a filopódiumok motilitása és ez tovább erősödik az SH3 foszforilációjának pontmutációval történő gátlásakor. A PKA/PKC mediált foszforilációban szerepet játszó prolin gazdag régió T1065-ös helyének mutációja blokkolja a vad típusú Caskin1 hatását. Az adatok alapján feltételezhető, hogy a Caskin1 állványfehérjének szerepe van a növekedési faktor függő jelátvitelben és a szinapszisok stabilizációjában.